支原體污染
支原體是一類缺乏細胞壁呈高度多形性的原核細胞型微生物,大小為0.1~0.3微米,所以除菌濾器無法正常對支原體進行濾除,是目前所知能在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖的最小的微生物。在細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細胞被支原體污染一般難以察覺。
支原體污染的影響:
1、影響細胞的生長狀態(tài)及形態(tài)
支原體可使培養(yǎng)液中支持細胞生長的營養(yǎng)物質(zhì)含量減少,造成細胞生長緩慢甚至停止;細
胞狀態(tài)變差,生長變慢,在顯微鏡下觀察可能會有小黑點,但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。會導(dǎo)
致細胞微管解聚,引起細胞一系列病變,表現(xiàn)為細胞收縮、貼壁細胞脫落、裂解等。細胞傳
代以后就出現(xiàn)細胞間黑點,細胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細胞,最終細胞漂浮,完全
死亡。
2.影響細胞的代謝和功能
培養(yǎng)液中的精氨酸被支原體大量消耗,引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙;支原體活動使培養(yǎng)基成分發(fā)生改變,影響細胞代謝;支原體吸附在細胞表面,破壞細胞膜的完整性,影響細胞信號傳遞;支原體消耗細胞的核苷庫—染色體異常。
3、其他
此外,支原體污染還會影響一些病毒在細胞中的產(chǎn)量、使惡性細胞致癌能力下降、影響
淋巴細胞分化等。
支原體污染來源:
包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
預(yù)防及處理:
控制環(huán)境污染、嚴格實驗操作、細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌、在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。
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