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01

透析

透析，一種小分子能夠在半透膜上的孔自由通過，大分子不能通過該孔而被截留在半透膜內(nèi)，實(shí)現(xiàn)大分子物質(zhì)和小分子物質(zhì)分離純化的實(shí)驗(yàn)方法；

透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。

保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”

02

透析分離物質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)

樣品回收率高；操作簡(jiǎn)單，無(wú)需繁瑣準(zhǔn)備工作；分離條件溫和。

缺點(diǎn)

耗時(shí)較長(zhǎng)；樣品和雜質(zhì)之間的分子量差較大。

03

干型透析袋使用方法

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1

剪取適當(dāng)長(zhǎng)度的透析袋（如10cm）；

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2

在大體積（500ml）的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA.2Na (pH 8.0)中，將其煮沸10分鐘；

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3

取出后用蒸餾水徹底清洗透析袋；

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4

再放在500ml的1mmol/L EDTA.2Na(pH 8.0)中將其煮沸10分鐘，取出后再用蒸餾水徹底清洗；

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5

暫不使用的話需要將透析袋完全浸泡到透析袋儲(chǔ)存液中，可存放于4-37度；

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6

浸泡在透析袋儲(chǔ)存液中的透析袋取出使用前，須將透析袋內(nèi)裝滿水然后排出，將之清洗干凈，內(nèi)外沖洗三次方可。

小提示：實(shí)驗(yàn)要求不高的可以用簡(jiǎn)易處理方法，即在沸水中煮10min即可使用。

04

下述透析程序是一個(gè)普遍的基礎(chǔ)透析過程

在開始透析之前應(yīng)考慮到許多變數(shù)。透析樣品溶劑、膜的化學(xué)相容性、膜的截留分子量，透析溶劑、透析體積、溫度等變量都會(huì)影響透析速率，因此，一些應(yīng)用中下述透析過程可能需要適當(dāng)?shù)淖兓?/span>

1.把適量的透析液（緩沖液）加入透析裝置；

2.裁剪適當(dāng)長(zhǎng)度的透析管，預(yù)留一段額外長(zhǎng)度；

3.把透析管插入打開的透析夾，在約超出透析夾3-5毫米的位置再夾住。不要折疊透析袋；

4.由透析管開口端將樣品裝入。調(diào)整一下頂部空間的長(zhǎng)度，夾緊透析夾；

5.把透析樣品放在合適的透析緩沖液中；

6.透析要根據(jù)具體的應(yīng)用需求。通常情況下，允許過夜透析。在持續(xù)透析的過程中，至少要進(jìn)行3次全部更換透析液。建議在（透析后）2-4小時(shí)，6-8小時(shí)和10-14小時(shí)（第2天早晨）更換透析液。在最后一次透析液的更換后要至少繼續(xù)進(jìn)行2小時(shí)的透析。

05

使用注意事項(xiàng)

a.透析袋不可以長(zhǎng)期浸泡在純水中，易被污染；

b.樣品濃度不可太大；

c.樣品和透析液體積比一般是1:50~500；

d.樣品濃度越高，透析所需時(shí)間越長(zhǎng)，透析液需要更頻繁的更換；

e.在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存情條件下，保質(zhì)期為兩年。（備注：一旦變潮濕，不要讓透析袋干燥，會(huì)造成孔隙結(jié)構(gòu)不可恢復(fù)的倒塌）。