細(xì)胞培養(yǎng)——無菌操作技術(shù)
在我們生活的環(huán)境中微生物可以說是無處不在，而微生物實(shí)驗(yàn)，特別是各類動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)，當(dāng)我們的樣本被某種其他微生物沾染，發(fā)現(xiàn)的早或許還有補(bǔ)救，但操作起來也比較繁瑣，并且處理過程還需要避免二次污染，這操作難度可想而知了。倘若發(fā)現(xiàn)的稍微晚了一些，該樣本就只能尸骨無存了，作廢處理。
因此對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)成功操作最基本的要點(diǎn)是：任何與細(xì)胞接觸的物品必須是無菌的。無菌技術(shù)在理論上是很簡單的：阻止無菌的、未被污染的物質(zhì)或物品與任何有菌的、被污染的物體相接觸。任何直接或間接地與培養(yǎng)相接觸的物品必須無菌。理想化的情況是所有無菌操作都應(yīng)該在一個(gè)層流式超凈臺(tái)中進(jìn)行。
保證無菌操作中需用到的洗手液、75%乙醇、95%乙醇、實(shí)驗(yàn)室工作服、手術(shù)用乳膠手套。
無菌操作前用洗手液充分刷洗手。不同的需求選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)工作服。為保證無菌條件，穿好實(shí)驗(yàn)服，戴乳膠手套后還需在實(shí)驗(yàn)開始前以及無菌操作過程中，還應(yīng)經(jīng)常地用75％酒精消毒戴著手套的雙手。 實(shí)驗(yàn)完成后脫掉防護(hù)手套后徹底沖洗雙手。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中樣品處理的全過程都應(yīng)該在一個(gè)潔凈的工作間內(nèi)進(jìn)行。層流式潔凈間為無菌操作提供了一個(gè)最適的可控制環(huán)境。對(duì)將參與無菌操作的各種物品的工作區(qū)域要進(jìn)行清潔。 使用前后要用75％乙醇、紫外輻射或其他途徑處理工作面。 無論怎樣，當(dāng)所用物品介入潔凈工作間時(shí)都要用消毒劑處理。按照從潔凈到污物的順序合理安排各種物品，以防污染物件對(duì)清潔物件的交叉污染。任何細(xì)小的污染物應(yīng)立即投入到消毒盤內(nèi)。 無菌工作完成后，及時(shí)清理各種較大的污物或其他要想處理的廢棄物，并放置在指定的包裝袋或盤內(nèi)，然后高壓滅菌。 與相關(guān)物品接觸的器械的關(guān)鍵部分浸泡于95％乙醇中。從乙醇中小心取出器械時(shí)，切勿碰觸其潔凈部位。待乙醇自然揮發(fā)后，持器械在噴燈火焰上通過，去除殘留的乙醇。 器械使用前，切勿碰觸任何未經(jīng)消毒的物件，冷卻10s 后再用。
警告： 1 75%、95％乙醇都是是易燃品，乙醇容器要置于一定范圍的安全處而遠(yuǎn)離明火。 2 器械使用完畢后重新浸泡在乙醇消毒劑中，以備使用。 3 手握接種環(huán)柄，于中間部位開始在酒精燈火焰上前后移動(dòng)燒灼金屬圈，直至出現(xiàn)橘紅色，然后冷卻至室溫（約10s) ，待用。 4 完成接種后，重新燒灼接種圈，清除殘余的生物活性物質(zhì)。冷卻至室溫，放置備用。
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