核酸提取—瓷珠法
核酸是生物界一類非常重要的生物大分子。它在生物繁殖、發(fā)育、維持、衰老和死亡等所有生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用。目前，核酸已成為生物化學(xué)、遺傳學(xué)等生命相關(guān)學(xué)科的研究熱點(diǎn)。核酸研究的首要前提是能夠?qū)⑵鋸谋姸鄰?fù)雜的生物大分子中提取出來(lái)，并進(jìn)行一定程度的純化，以供相應(yīng)的科學(xué)研究和實(shí)際應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)原理 在帶電荷的鹽離子（如Na+）的作用下，帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)在解離的鹽離子和羧基之間形成離子橋，使DNA特異性地吸附在羧基磁珠表面。在去除PEG和鹽后，添加水性分子將快速充分地水化DNA，解除三者之間的離子相互作用，使吸附在磁珠上的DNA被提取出來(lái)。
實(shí)驗(yàn)步驟 01 配置蛋白酶K溶液 按照配置比例在一定量蛋白酶K干粉中加入一定量的去離子水，然后進(jìn)行瞬時(shí)離心或者反復(fù)搖晃震蕩使其完全溶解。短期使用可于4℃保存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存需置于-20℃。 02 樣本裂解 使用移液槍將樣本加入離心管中，并且加入裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液。然后再加入結(jié)合緩沖液，其中包含了磁珠用于吸附DNA。反復(fù)震蕩混勻，使樣本裂解且DNA結(jié)合在磁珠上。 03 磁鐵吸附 將離心管放置在磁力架上，使磁珠被磁鐵吸附到離心管的管壁上，然后用移液槍吸附上清并棄去，保留磁珠。 04 洗脫DNA 用移液槍在離心管中加入洗滌緩沖液，并且反復(fù)搖晃震蕩使磁珠重新懸浮，然后將離心管放置在磁力架上，吸附磁鐵，吸取上清并棄去。重復(fù)洗滌兩次，用移液槍移取上清液于另一離心管中，此時(shí)上清液里即為DNA。 05 其他提取法 以上操作為手動(dòng)提取，除此之外還可以選擇使用核酸提取儀進(jìn)行DNA提取。大致操作步驟為：將第2步中經(jīng)過裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液處理過的樣本加入深孔板當(dāng)中，然后將深孔板放進(jìn)提取儀，配合磁棒套自動(dòng)完成DNA提取過程。
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